如何選擇緩沖劑？

選擇緩沖系統(tǒng)時(shí)，緩沖液的pKa變化超過pH單元，緩沖能力明顯下降，緩沖系統(tǒng)不得影響蛋白質(zhì)的活性或DNA的穩(wěn)定性，避免其他離子的干擾。另外，考慮到溫度的影響，溫度不僅影響緩沖液，還影響細(xì)胞，很多動(dòng)物細(xì)胞在37℃的生理狀況下pH為7.07.5，溫度下降到0℃時(shí)達(dá)到8.0。

一、磷酸鹽緩沖液的優(yōu)缺點(diǎn):

磷酸鹽緩沖液是廣泛使用的緩沖劑，由于有二次解離，緩沖的pH值范圍廣，可配置各種pH值的酸性、堿性、中性緩沖液。

優(yōu)點(diǎn):

容易配合各種濃度。

適用的pH范圍很廣。

pH受溫度的影響很小。

稀釋后pH的變化很小。

缺點(diǎn):與常見的鈣離子、鎂離子和重金屬離子合成沉淀。

二、Tris緩沖液的優(yōu)缺點(diǎn):

Tris緩沖液是生物化學(xué)研究中廣泛使用的緩沖劑，其本身是弱堿，常用的有效pH在中性范圍內(nèi)。

優(yōu)點(diǎn):

堿性強(qiáng)，只有這種緩沖液可以配置從酸到堿的范圍pH緩沖液

對(duì)生物化學(xué)過程的干擾很小，不會(huì)沉淀鈣、鎂離子和重金屬離子

因?yàn)槿菀孜湛諝庵械腃O2，所以制作的緩沖液必須密封

該緩沖液對(duì)某個(gè)pH電極產(chǎn)生一定的干擾作用，因此使用與Tris溶液兼容的電極。

缺點(diǎn):

pH受濃度影響較大，稀釋10倍，pH變化大于0.1。

溫度效應(yīng)大，例如4℃時(shí)pH=8.4，37℃時(shí)pH=7.4。

三、HEPES緩沖液的優(yōu)缺點(diǎn):

HEPES是非離子兩性緩沖液，在pH7.27.4范圍內(nèi)具有良好的緩沖能力，常用于生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒和PCR診斷試劑盒。

優(yōu)點(diǎn):開放式培養(yǎng)和細(xì)胞觀察可以維持一定的pH值，對(duì)細(xì)胞沒有毒性作用。

缺點(diǎn):高濃度時(shí)可能對(duì)細(xì)胞有毒，與其他緩沖劑相比價(jià)格稍高。

四、PIPES緩沖液的優(yōu)缺點(diǎn):

PIPES是哌喹緩沖液家族的一員，與HEPES屬于同一家族。是兩性離子Goods緩沖液，在6.1到7.5的pH范圍內(nèi)有效。由于pH范圍與HEPES略有差異，因此PIPES的濃度HEPES濃度的一半。

優(yōu)點(diǎn):

該緩沖劑不與金屬結(jié)合，可用于含有金屬離子的溶液

可用于色譜分析，電子顯微鏡固定植物細(xì)胞，替代草甘膦緩沖液。

缺點(diǎn):

溶液的pH值上升到6.5以上時(shí)，PIPES的游離酸容易溶解，但PIPES的鈉鹽容易溶解

使用游離酸形式的緩沖液時(shí)，請(qǐng)使用氫氧化鈉將其轉(zhuǎn)化為鈉鹽，以提高在較低的pH下的溶解度

像HEPES一樣，PIPES不適用于與氧化還原反應(yīng)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)。因?yàn)樗鼤?huì)形成自由基。