學(xué)會(huì)槐米中蘆丁的提取、結(jié)晶與含量測(cè)定

??蘆丁，也稱(chēng)為蕓香苷，是一種廣泛存在于植物中的黃酮類(lèi)化合物。它在槐米中的含量高達(dá)12%～16%，是提取蘆丁的理想原料。蘆丁分子含有酚羥基，顯酸性，可溶于稀堿液中，在酸液中沉淀析出，因此可以利用這一性質(zhì)進(jìn)行提取分離。蘆丁易溶于熱水和熱乙醇，而較難溶于冷水和冷乙醇，這使得重結(jié)晶方法成為精制蘆丁的有效手段。液相色譜法可用于測(cè)定蘆丁的含量。

 實(shí)驗(yàn)試劑

實(shí)驗(yàn)步驟

1、蘆丁的提取（堿提酸沉法）

????1)稱(chēng)取槐米20g，加入沸水400mL及1g硼砂，加熱至微沸，調(diào)節(jié)pH至8～9，保持微沸30min，過(guò)濾沉淀，合并濾液。

????2)濾液用濃鹽酸調(diào)pH至4～5，靜置12h，過(guò)濾沉淀，用冷水洗滌，得到蘆丁的粗產(chǎn)物。

2、蘆丁的精制

????稱(chēng)量粗品蘆丁的質(zhì)量，懸浮于蒸餾水中，煮沸溶解，過(guò)濾，冷卻濾液，靜置析晶，干燥得到精制蘆丁。

3、蘆丁的純化

????1)稱(chēng)取粗蘆丁產(chǎn)品，溶解于甲醇，加入硅膠，進(jìn)行柱色譜分離。

????2)用70%工業(yè)乙醇洗脫，收集洗脫液，進(jìn)行薄層色譜鑒定，合并含蘆丁的溶液，蒸餾后冷卻析晶，得到純化蘆丁。

4、蘆丁的鑒定

????1)化學(xué)法鑒定：進(jìn)行α-萘酚-濃硫酸反應(yīng)、鋯-枸實(shí)驗(yàn)、鹽酸鎂粉實(shí)驗(yàn)等。

????2)薄層色譜鑒定：使用聚酰胺膜和不同展開(kāi)劑，進(jìn)行氨熏和三氯化鋁顯色劑顯色。

????3)紫外光譜法鑒定：溶解樣品于甲醇，進(jìn)行紫外光譜分析。

????4)紅外光譜法鑒定：取樣品約1mg，進(jìn)行紅外光譜分析。

????5)氫核磁共振法鑒定：將蘆丁樣品與蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品譜圖對(duì)照。

5、蘆丁含量測(cè)定（HPLC法）

????1)配制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進(jìn)行液相色譜測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

????2)配制蘆丁樣品溶液，進(jìn)行液相色譜測(cè)定，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。

 實(shí)驗(yàn)小貼士:

為什么提取蘆丁時(shí)用水作溶劑，而重結(jié)晶時(shí)用乙醇作溶劑？

????提取蘆丁時(shí)使用水作為溶劑是因?yàn)樘J丁在熱水中具有較高的溶解度，而在冷水中溶解度較低。這種溶解度的差異使得蘆丁能夠在加熱時(shí)溶解，而在冷卻后重新結(jié)晶析出，從而實(shí)現(xiàn)提取。重結(jié)晶時(shí)使用乙醇作為溶劑，是因?yàn)橐掖伎梢詼p少蘆丁在溶液中的溶解度，有助于蘆丁的結(jié)晶析出。此外，乙醇的揮發(fā)性有助于在干燥過(guò)程中去除溶劑，得到純凈的蘆丁晶體。